《刺客信条2》中的主角将扮演埃齐奥·奥迪托雷·德·佛罗伦萨，他是博吉亚家族横冲直撞期间的贵族。在整个第三人称斩杀者中，我们将见到美第奇夫妇，了解有关达芬奇和尼科洛·马基雅维利的更多细节。与此同时，我们的敌人将是博吉亚、弗朗切斯科·帕齐和吉罗拉莫·萨沃纳罗拉。戴斯蒙德·迈尔斯落入现代圣殿骑士手中的故事发生在1476年至1499年的文艺复兴时期。
两个组织之间正在进行激烈的智力斗争。对象16绑架了戴斯蒙德，以便他可以学会更好地控制他的祖先并成为一名真正的刺客，而圣殿骑士只想掌握有关伊甸粒子的信息。
游戏的事件是在为父亲和兄弟进行血腥复仇的基础上展开的。当埃齐奥还是个孩子的时候，他失去了父亲和兄弟，因为游戏的主要对手帕齐想要这样做。在杀死了几乎整个帕齐家族之后，埃齐奥得知圣殿骑士的下一步行动将在威尼斯进行，他们打算在那里统治权力并寻找伊甸粒子。开发人员为播放器添加了多项创新。例如，刺客现在可以潜入水中并在那里游泳，直到他的生命值耗尽。我们还可以从敌人手中抢夺武器。斩击者在战斗方面变化很大，所以组合的数量也发生了变化。
鹰眼视觉，刺客的主要优势——也发生了变化。现在你正在使用这个能力，你周围的一切都会合并成一个背景，对手会以黄色或红色突出显示，这取决于任务中是否有一些个性;我们的盟友以蓝色突出显示，安全避难所或任务中物品可能显示为白色的地方。在开放世界中，刺客可以随时对付敌人。额外的任务是抽我们的刺客并深入研究历史。埃齐奥将第一次有机会提高自己的知识和技能。
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